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大鼠腎素(PRA)elisa試劑盒操作注意事項
更新時間:2017-04-18   點擊次數:1117次

大鼠腎素(PRA)elisa試劑盒簡介

    群體反應性抗體(panel reactive antibodies,PRA)是指大鼠腎素,是各種組織器官移植術前篩選致敏受者的重要指標,與移植排斥反應和存活率密切相關。腎素(renin)是腎小球旁器(也稱球旁復合體)的球旁細胞釋放的一種蛋白水解酶。腎素、血管緊張素、醛固酮三者是一個相連的作用系統,稱為腎素-血管緊張素-醛固酮系統。腎素釋放受多方面因素的調節,當動脈血壓降低,循環血量減少時,交感神經興奮,致密斑感受器興奮,入球小動脈的血壓和血流量均減少,對入球小動脈的牽張刺激減弱,激活了管壁的牽張感受器,促進球旁細胞釋放腎素。同時,腎小球濾過率隨腎血流量減少而減少,流過致密斑的鈉離子濃度減少,致密斑被激活,轉而促進球旁細胞釋放腎素。球旁細胞受交感神經支配,交感神經興奮,增加腎素釋放。

信帆生物產品大鼠腎素(PRA)elisa試劑盒樣本處理注意事項

    收集標本前都必須有一個完整的計劃,必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。我們提倡新鮮標本盡早檢測,對收集后當天就進行檢測的標本,及時儲存在4℃備用,如有特殊原因需要周期收集標本,請造模取材后,將標本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。因冰室與室溫存在一定溫差,蛋白極易降解,直接影響實驗質量,所以避免反復凍融。

具體樣本的處理和要求如下:

1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。

2. 血漿:應根據試劑盒的要求選擇 EDTA 、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,加入 10 %( v/v )抗凝劑( 0.1M 檸檬酸鈉或 1% heparin 或 2.0%EDTA.Na2) 混合 10-20 分鐘后,離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉 / 分)。仔細收集上清。如有沉淀形 成,應再次離心。

3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4. 細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

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