信帆生物革蘭陽性菌裂解緩沖液了解一下
細菌細胞中革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌由于細胞壁結構不同,裂解時也要考慮不同結構的Lysis Buffer。所以在采購Lysis Buffer產品時,一定要進行選擇。Lysis Buffer也有它的共性,如緩沖能力、破壞細胞壁、細胞膜的裂解能力等。
Lysis Buffer是生物學實驗中經常使用的緩沖液,它是一個很大很寬泛的概念,它并不特指某種固定的溶液配方,而是要根據不同的實驗目的有針對性的選擇和調整。
裂解都用到緩沖劑,只要在緩沖溶液pH范圍內,BPS、Tris都可以作為緩沖劑,氯化鈉的濃度直接影響到蛋白與蛋白之間的相互作用,一般濃度在0-1M之間。一般而言,氯化鈉濃度越高,越不利于蛋白之間結合。EDTA濃度一般在0-5mM,也是緩沖劑的主要成分,也是酶活性抑止劑,量大可使酶失活保護蛋白。表面活性劑是非常值得關注的,離子性表面活性劑的裂解效果zui強,兩性非離子性表面活性劑裂解效果次之。一般離子性表面活性劑的用量在0.01%-0.05%之間,兩性表面活性劑用量在0-10mM之間,非離子性表面活性劑用量在0.1%-0.2%之間。在裂解液中常用到表面活性劑有Tritonx-100、NP-40、脫氧膽酸鈉、肌氨酸鈉、SDS、CTAB等。
裂解液中還有一個很重要的成分——蛋白酶抑止劑,其作用是阻止蛋白酶對細胞組織的消化作用,使組織細胞受到*的保護。不同的蛋白酶需要不同的抑止劑,對其選擇相當重要,只有正確選擇,才能有效抑止蛋白的降解,使其維持原有的蛋白相互作用。 常用的蛋白酶抑止劑有多聚鈉,釩酸鈉、PMSF、DTT、巰基乙醇、Pepstatin(胃蛋白酶抑止劑)、Lenpeptin(亮抑止肽)、Aprotinin(抑蛋白酶肽)等。有些抑止劑穩定性很差,一般不放入裂解儲存液中,在裂解前臨時加入。
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