50 管/48 樣
擇 注意：正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義：
FC 是構(gòu)成細(xì)胞膜的主要成分，也是合成腎上腺皮質(zhì)激素、性激素、膽汁酸及維生素 D 等生
理活性物質(zhì)的重要原料。FC 濃度可作為脂代謝的指標(biāo)。
測定原理：
FC 氧化酶催化 FC 生成△4-膽甾烯酮和 H 2 O 2 ，過氧化物酶催化 H 2 O 2 、4-氨基安替比林和酚
生成紅色醌類化合物，在 500nm 有吸收峰，其顏色深淺與 FC 含量成正比。
自備儀器和用品：
可見分光光度計、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、1mL 玻璃比色皿、異丙醇和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：異丙醇 50mL（自備）；
工作液：液體 50mL×1 瓶，4℃保存；
標(biāo)準(zhǔn)品：液體 1mL×1 支，濃度為 0.5 μ mol/mL，4℃保存。
FC 的提取：
1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，
加入 1mL 試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。8000g，4℃離心 10min，取上清置冰上待測。
2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（10 4 個）：試劑一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建
議 500 萬細(xì)胞加入 1mL 試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 2 秒，間隔 3
秒，總時間 3min）；然后 8000g，4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測。
3．血清（漿）樣品：直接測定。
測定操作：
1. 分光光度計預(yù)熱 30 min，調(diào)節(jié)波長到 500 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. FC 工作液在 40℃水浴中預(yù)熱 30min。
3. 標(biāo)準(zhǔn)管：依次在 1mL 玻璃比色皿中加入 250μL FC 標(biāo)準(zhǔn)液和 750μL FC 工作液，混勻，靜
置 24h 后于 500nm 測定 A 標(biāo)準(zhǔn)管。
4. 測定管：依次在 1mL 玻璃比色皿中加入 250μL FC 待測液和 750μL FC 工作液，混勻，靜
置 24h 后于 500nm 測定 A 測定管。
注意：標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。
計算公式：
1. 血清（漿）中 FC 含量計算：
FC 含量（μmol /dL）= C 標(biāo)準(zhǔn)液×A 測定管÷A 標(biāo)準(zhǔn)管×100mL
=50×A 測定管÷A 標(biāo)準(zhǔn)管
C 標(biāo)準(zhǔn)液：0.5μmol/mL；100 mL：1dL=100 mL。
2. 組織中 FC 含量計算：
(1)按樣本蛋白濃度計算
FC 含量（μmol / mg prot）= C 標(biāo)準(zhǔn)液×A 測定管÷A 標(biāo)準(zhǔn)管÷Cpr
= 0.5×A 測定管÷A 標(biāo)準(zhǔn)管÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算
FC 含量（μmol / g 鮮重）= C 標(biāo)準(zhǔn)液×A 測定管÷A 標(biāo)準(zhǔn)管÷W
= 0.5×A 測定管÷A 標(biāo)準(zhǔn)管÷W
C 標(biāo)準(zhǔn)液：0.5μmol/mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g/mL
3. 細(xì)胞、細(xì)菌中 FC 含量計算：
FC 含量（μmol /10 4 cell）= C 標(biāo)準(zhǔn)液×A 測定管÷A 標(biāo)準(zhǔn)管÷細(xì)菌或細(xì)胞（10 4 cell /L）
=0.5×A 測定管÷A 標(biāo)準(zhǔn)管÷細(xì)菌或細(xì)胞（10 4 cell /L）
C 標(biāo)準(zhǔn)液：0.5μmol/mL。
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