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溶菌酶檢測試劑盒檢測原理
更新時間:2020-02-14   點擊次數:1029次

溶菌酶檢測試劑盒檢測原理



產品簡介:
溶菌酶(lysozyme)又稱胞壁質酶(muramidase)或N-乙酰胞壁質聚糖水解酶(N-acetylmuramide glycanohydrlase),是一種能水解致病菌中黏多糖的堿性酶。主要通過破壞細胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之間的β-1,4糖苷鍵,使細胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽,導致細胞壁破裂內容物逸出而使細菌溶解。溶菌酶還可與帶負電荷的病毒蛋白直接結合,與DNA、RNA、脫輔基蛋白形成復鹽,使病毒失活。因此,該酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。

以蛋清為原料,在pH6.5條件下用弱酸性陽離子交換樹脂732吸附后,再用硫酸銨洗脫,經透析后冷凍干燥得產品。

 

測定原理:

在一定濃度的混濁菌液中,由于溶菌酶能水解細菌細胞壁上肽聚糖使細菌裂解而濃度降低,透光度增強,故可以根據透光度變化來推測溶菌酶的含量。


操作步驟:

1、將配制好的應用菌液,標準應用液及所需檢測的樣本均放入37℃水浴箱中預溫5分鐘

以上。使菌液,標準液及檢測樣本的溫度達到37℃。

2、將可見分光光度計于530nm處,1cm光徑比色皿,以雙蒸水調透光度100 (比色皿準備兩只,一只用于調透光度100,一只用于測定)。

3、往相應編號的試管中加入0.2ml待測樣本,取2ml應用菌液迅速沖入試管中,立即混勻并計時。(標準品應用液取0.2ml雙蒸水,加入2ml應用菌液,其它操作與測定相同)

4、迅速倒入比色皿中在可見分光光度計530nm處比濁,5秒時讀取透光度值T0, 比色皿不要取出,在2 分5秒時讀取透光度值T2;

[注]:如5秒時來不及讀數,可20秒時讀取調透光度值T0,在2 分20秒時讀取透光度值T2,標準管需同樣操作。

5、求出2次透光度的差值(△T= T2-T0)。

[注]:用同一比色皿每檢測一個樣本后均要用雙蒸水沖洗干凈,才可再放第二個樣本或標準品應用液。


優點:

1、溶菌酶是很穩定的蛋白質,有較強的抗熱性。蛋清溶菌酶是C型,是已知的zui耐熱的酶;


2、溶菌酶不會因為有機溶劑的處理而失活,當轉移到水溶液中時,溶菌酶的活力可全部恢復;


3、溶菌酶可被冷凍或干燥處理,且活力穩定;


4、溶菌酶適宜pH5.3~6.4,可用于低酸性食品防腐;


5、溶菌酶生物試劑成本較低;


6、溶菌酶的抗菌譜較廣,不僅局限于G- 菌,對部分G+菌也有抑制效果;


7、溶菌酶作為防腐劑安全性高。溶菌酶是一種天然蛋白質,1992年FAO/WTO 的食品添加劑協會已經認定溶菌酶在食品中應用是安全的。

 

溶菌酶檢測試劑盒檢測原理

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