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總RNA提取試劑盒操作詳情

核糖核酸（縮寫為RNA，即Ribonucleic Acid），存在于生物細胞以及部分病毒、類病毒中的遺傳信息載體。RNA由核糖核苷酸經二酯鍵縮合而成長鏈狀分子。一個核糖核苷酸分子由，核糖和堿基構成。RNA的堿基主要有4種，即A（腺嘌呤）、G（鳥嘌呤）、C（胞嘧啶)、U()，其中，U（）取代了DNA中的T。核糖核酸在體內的作用主要是引導蛋白質的合成

人體一個細胞含RNA約10pg（含DNA約7pg）。與DNA相比，RNA種類繁多，分子量較小，含量變化大。RNA可根據結構和功能的不同分為信使RNA和非編碼RNA。非編碼RNA分為非編碼大RNA和非編碼小RNA。非編碼大RNA包括核糖體RNA、長鏈非編碼RNA。非編碼小RNA包括轉移RNA、核酶、小分子RNA等。小分子RNA（20~300nt）包括 miRNA、 SiRNA、 piRNA、scRNA、 snRNA、 snoRNA等，細菌也有小分子RNA（50~500nt）

操作步驟：

1. 樣品處理： a. 植物組織：取新鮮或-70℃凍存100mg組織在液氮中研磨，把粉末加入到1ml裂解液中混勻。
b. 動物組織：取新鮮或-70℃凍存100mg組織加1ml裂解液，用組織研磨杵或勻漿器勻漿處理。
c. 貼壁細胞：直接在培養板中加入裂解液裂解細胞，每106細胞加1ml 裂解液。用取樣器吹打混勻。
d. 細胞懸液：離心收集細胞。每106動物、植物和酵母細胞或每107細菌細胞加1ml裂解液混勻。
e. 血液處理：取0.2-1ml新鮮血液加3倍體積紅細胞裂解液，混勻后室溫放置10分鐘，10000rpm離心1分鐘。棄上清，若沉淀含有紅細胞，可加入2倍體積紅細胞裂解液重復裂解步驟。離心后沉淀加入1 ml裂解液混勻。
2. 將處理后的樣品在室溫放置5分鐘，使得核酸蛋白復合物*分離。
3. 向勻漿樣品中加0.2ml，蓋好管蓋，劇烈振蕩15秒，室溫放置3-5分鐘。
4. 2-8℃ 12000 rpm離心10分鐘。RNA主要在上層無色的水相中，把水相轉移到新管中，不要吸到沉淀。
5. 吸附柱前處理：在吸附柱中加入500ul 洗柱液，室溫放置2分鐘，2-8℃ 12,000 rpm離心2min，棄廢液。
6. 第4步收集的上清中加入200ul無水乙醇混勻，加入吸附柱靜置2分鐘，2-8℃ 12000rpm離心2min，棄廢液。
7. 向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇)，2-8℃ 12,000 rpm離心2min，棄廢液。
8. 向吸附柱中加入600ul漂洗液，2-8℃ 12,000 rpm離心2min，棄廢液。
9. 12000rpm離心2min，棄掉收集管，將吸附柱置于室溫放置數分鐘將吸附柱中殘余的漂洗液去除。
10. 將吸附柱放入新管中，向膜滴加50-100ul RNase free ddH2O，室溫放置5min，12000rpm室溫離心2min即得到RNA。

注意事項：
1，所有相關器皿耗材都應為RNase-free產品，操作過程要小心、手套避免環境中RNA酶污染樣品。
2，RNA在水溶液中OD值可能在1.5-1.9之間，但這并不表示RNA不純，需電泳檢測。