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線粒體呼吸鏈復合體Ⅱ檢測試劑盒使用方法

產品說明：線粒體復合體Ⅱ又稱琥珀酸-輔酶Q還原酶，廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞的線粒體中，催化琥珀酸氧化生成延胡索酸，同時輔基FAD還原為FADH2，后者進一步還原氧化型輔酶Q 生成還原型輔酶Q，是呼吸電子傳遞鏈的支路。復合體Ⅱ的催化產物還原型輔酶Q可進一步還原2,6-二氯吲哚酚，2,6-二氯吲哚酚在605nm有特征吸收峰，通過檢測2,6-二氯吲哚酚的減少速率來計算該酶活性。

注意：實驗之前建議選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品：可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、丙酮、冰和蒸餾水。 

注意事項： 

1、 為保證實驗結果的準確性，需先取1-2個樣做預實驗，如果測定的吸光值過高（高于1.5），可用蒸餾水稀釋上清液后再測定。計算結果時注意乘以稀釋倍數。若ΔA大于0.4，需將樣本稀釋適當倍數（計算公式中乘以相應稀釋倍數）；若ΔA偏小，則可以通過增加加入的樣本體積來提高靈敏度。

2、 樣本蛋白濃度需自行測定。由于提取液中含有一定濃度的蛋白（約1mg/mL），所以在測定樣本蛋白濃度時需要減去提取液本身的蛋白含量。

3、 推薦使用樣本蛋白濃度計算酶活，若用樣本質量計算，則需加測胞漿提取物酶活，上清和沉淀酶活之和方為總酶活。 4、 本試劑盒試劑足夠完成25管反應。

 5、 附:使用樣本重量計算公式：（樣本檢測數為 25T/12S） A、上清中復合體II活力的計算: 單位的定義：每g組織在反應體系中每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯吲哚酚定義為一個酶活力單位。復合體II活性（U/g 質量）=[ΔA1×V反總÷（ε×d）×109]÷(W÷V提取×V樣本)）÷T=476.2×ΔA1÷W ΔA1：上清測定值；V反總：反應體系總體積，10-3L；ε：2,6-二氯吲哚酚摩爾消光系數，2.1×104L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V提取：加入提取液體積，1mL；V樣：加入樣本體積，0.05mL；T：反應時間，2min；W：樣本重量，g；109：單位換算系數，1mol=109nmol。